簡要描述：本試劑盒是可用于細胞培養(yǎng)上清和體液樣本中細胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶聯(lián)免疫試劑。
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| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
|---|
本試劑盒是可用于細胞培養(yǎng)上清和體液樣本中細胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶聯(lián)免疫試劑。將能與細胞外囊泡表面的磷脂酰si氨酸（PS）特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)預(yù)包被到板上，細胞外囊泡與其反應(yīng)被固定后，以目的細胞外囊泡表面標記蛋白的sheng物素標記抗體作為檢測一抗，以試劑盒中的HRP標記鏈霉親和素為二抗，可高靈敏度檢測表面具有靶標記蛋白的細胞外囊泡。同時，可用不同物種的sheng物素標記抗體作為檢測一抗。此外，二抗采用HRP標記鏈霉親和素，與血液成分的非特異性結(jié)合低，可高靈敏度檢測血液樣本中的細胞外囊泡。
◆特點
● 高靈敏度和定量檢測
可以直接檢測樣本中的細胞外囊泡（無需分離）
可以從2.5 μL左右的血液樣本中檢測細胞外囊泡（節(jié)約樣本）
靈敏度是WB法的50~1000倍（檢測微量信號）
● 應(yīng)用廣泛
可定性或定量檢測培養(yǎng)上清和血液樣本中的細胞外囊泡
測定EV-depleted FBS中殘留的細胞外囊泡數(shù)量
使用凝集素分析外泌體的糖鏈
● 通用的sheng物素標記檢測方法
一抗可靈活更換成不同動物來源的抗體或凝集素等的sheng物素標記一抗
● 操作簡單以及再現(xiàn)性高
優(yōu)化細胞外囊泡檢測用的試劑盒和試劑
◆檢測原理
FUJIFILM Wako試劑盒PS Capture™ Exosome ELISA Kit（Anti Mouse IgG POD）（Code No. 297-79201）（圖右）中，一抗使用小鼠抗體，二抗使用抗小鼠IgG抗體，但是本試劑盒（圖左），使用sheng物素標記抗體作為一抗，二抗使用HRP標記的鏈霉親和素。因此，可以不受限于抗體種類分析細胞外囊泡。
◆試劑盒組成
試劑盒組成（96次用） | 容量 |
Exosome Capture 96 Well Plate | 1塊（8 well×12 strips） |
Reaction Buffer | 80 mL×1支 |
Washing Buffer (10×) | 100 mL×1支 |
Exosome Binding Enhancer (100×) | 10 mL×1支 |
Control Biotinylated Antibody Anti-CD63 (100×) | 120 μL×1支 |
HRP-conjugated Streptavidin (100×) | 240 μL×1支 |
TMB Solution | 12 mL×1支 |
Stop Solution | 12 mL×1支 |
Plate Seal | 4塊 |
使用說明書 | 1份 |
◆對應(yīng)樣本
樣本 | 定性分析 | 定量分析 |
細胞培養(yǎng)上清液 | 可以實現(xiàn)○ | 可以實現(xiàn)○ |
體液樣本 | 可以實現(xiàn)○ | 可以實現(xiàn)○ |
◆數(shù)據(jù)
■ 血液樣本以及培養(yǎng)上清液樣本的稀釋線性（Linearity）
用從COLO201細胞培養(yǎng)上清液中純化的細胞外囊泡制成的標準曲線為基準，檢測①人血清稀釋樣本，②人肝素血漿稀釋樣本，③人EDTA血漿稀釋樣本（各2個樣本，稀釋4次）以及④COLO201細胞培養(yǎng)上清液稀釋4次的樣本中的外泌體濃度（檢測CD63），評價各個樣本的稀釋線性。
結(jié)果表明，在CD63檢測中，血清和肝素血漿樣本在雙倍稀釋或更高稀釋度下可獲得良好的線性。EDTA血漿樣本在5倍以上稀釋度下可獲得良好的線性。
■ PS親和法和抗體法的比較（捕獲EVs的能力）
將預(yù)處理※1的各個細胞培養(yǎng)上清液分別添加至已固相化的抗CD抗體（CD9, CD63, CD81）或Tim4微孔板的各個孔中進行反應(yīng)。然后，用各個sheng物素標記抗CD抗體（CD9, CD63, CD81）檢測結(jié)合的外泌體。
※1 預(yù)處理條件: 10,000×g, 30分
PS親和法與抗體法相比，更高效率地捕抓到了各種細胞株來源的外泌體
■ 測定市面上“無外泌體血清"中殘留的外泌體數(shù)量
用sheng物素標記抗CD9抗體※4檢測未處理的FBS，市場上售賣的“無外泌體血清"（ EV-depleted FBS）以及超離處理的FBS（UC-treated FBS）※3 中殘存的外泌體。
※3 超離條件：160,000×g, 16 h
※4 用Biotin Labeling Kit-SH（產(chǎn)品編號：348-90941）標記抗CD9抗體（產(chǎn)品編號：014-27763）。
Capture: Tim4 / Detection：sheng物素標記抗CD9抗體
使用PS親和法的ELISA系統(tǒng)，可以簡單便利地檢測到外泌體殘留量。
■ 應(yīng)用于糖鏈分析：rBC2LCN凝集素和Tim4的雙抗夾心ELISA
用sheng物素標記抗CD63抗體（產(chǎn)品編號：019-27713）和sheng物素標記rBC2LCN凝集素※6檢測預(yù)處理完成※5的5倍稀釋iPS細胞培養(yǎng)上清液中的外泌體。
※5 預(yù)處理條件: 10,000 × g, 30 min
※6 用 EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin（ThermoFisher公司）標記rBC2LCN（產(chǎn)品編號：029-18061）。
捕獲用抗體: Tim4 / 檢測用抗體: 各sheng物素標記體
＜參考文獻＞ S. Saito, et al., Sci. Rep., 8, 3997 (2018)
通過與各種凝集素相組合，可應(yīng)用于外泌體表面上的糖鏈分析。
■ 檢測人正常血液樣本中外泌體標記物的相對濃度
準備人血清（10個樣本），EDTA血漿（9個樣本）和肝素血漿（9個樣本）作為正常血液樣本，檢測外泌體標記物CD63和CD9，以及被認為是癌細胞外泌體特異性標記物的EpCAM。
結(jié)果顯示，在各個血液樣本中均檢測出了外泌體標記物CD63和CD9，但只有在癌細胞外泌體中才檢測出極微量的表面抗原EpCAM。
■ COLO201來源純化外泌體的添加回收測試
準備混合血清，EDTA血漿，肝素血漿的2倍稀釋液，并添加從COLO 201細胞培養(yǎng)上清中提取的3種濃度的COLO201來源外泌體，以EpCAM檢測來確認回收率。
在EpCAM檢測中，添加回收率在100％±10％的范圍內(nèi)，顯示出良好的回收性能※。
※ 考慮到【血液檢體的稀釋線性】，EDTA血漿樣本建議稀釋5倍以上進行檢測。
◆抗外泌體標記抗體系列
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 交叉反應(yīng) | 包裝 |
014-27763 | Anti CD9, Monoclonal Antibody (1K) 抗CD9單克隆抗體（1K） | 人，牛 | 100 µL |
012-27063 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13) 抗CD63，單克隆抗體（3-13） | 人 | 100 µL |
011-27773 | Anti CD81, Monoclonal Antibody (17B1) 抗CD81單克隆抗體（17B1） | 人，牛 | 100 µL |
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 偶聯(lián)基團 | 包裝 |
014-27643 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Fluorescein Conjugated 抗CD63，單克隆抗體（3-13），熒光素結(jié)合 | 綠色熒光素 | 100 次用 |
011-27751 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Red Fluorochrome(635) Conjugated | 紅色熒光素 | 25 次用 |
017-27753 | 100 次用 | ||
019-27713 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Biotin Conjugated 抗CD63單克隆抗體（3-13），sheng物素偶聯(lián) | sheng物素 | 100 µL |
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PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（抗小鼠IgG POD）
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 298-80601 | PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（鏈霉親和素HRP） PS Capture™ Exosome ELISA Kit （Streptavidin HRP） | 96 tests | 基因研究用 | - |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 014-27763 | Anti CD9, Monoclonal Antibody (1K) 抗CD9單克隆抗體（1K） | 100 µL | - | - |
| 012-27063 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13) 抗CD63，單克隆抗體（3-13） | 100 µL | - | - |
| 011-27773 | Anti CD81, Monoclonal Antibody (17B1) 抗CD81單克隆抗體（17B1） | 100 µL | - | - |
| 014-27643 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Fluorescein Conjugated 抗CD63，單克隆抗體（3-13），熒光素結(jié)合 | 100 tests | - | - |
| 011-27751 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Red Fluorochrome(635) Conjugated 抗CD63單克隆抗體（3-13），紅色熒光染料（635）偶聯(lián) | 25 tests | - | - |
| 017-27753 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Red Fluorochrome(635) Conjugated 抗CD63單克隆抗體（3-13），紅色熒光染料（635）偶聯(lián) | 100 tests | - | - |
| 019-27713 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Biotin Conjugated 抗CD63單克隆抗體（3-13），sheng物素偶聯(lián) | 100 μL | - | - |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 294-84101 | MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS | 2 tests | 基因研究用 | - |
| 290-84103 | MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS | 10 tests | 基因研究用 | - |
| 297-79201 | PS Capture™ 外泌體ELISA 試劑盒（抗小鼠IgG POD） PS Capture™ Exosome ELISA Kit （Anti Mouse IgG POD） | 96 tests | 基因研究用 | - |
| 297-79701 | PS Capture™外泌體流式試劑盒 PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit | 300 tests | 基因研究用 | - |
| 012-27063 | 抗CD63，單克隆抗體（3-13） Anti CD63, Monoclonal Antibody （3-13） | 100 uL | 免疫化學用 | - |
| 012-27063 | 抗CD63，單克隆抗體（3-13） Anti CD63, Monoclonal Antibody （3-13） | 100 μL | 免疫化學用 | - |
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