PRIME-XV ™ DENDRITIC CELL MATURATION CDM

樹突細(xì)胞培養(yǎng)基

PRIME-XV樹突細(xì)胞成熟培養(yǎng)基提供了一個(gè)穩(wěn)健的受控過程，在化學(xué)成分明確的條件下生成 Mo-DC，從而維持其誘導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答的能力。

用于樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)的化學(xué)成分明確、無動(dòng)物成分的培養(yǎng)基

●　優(yōu)化單核細(xì)胞向未成熟樹突狀細(xì)胞（iDC）的分化以及隨后mDC的成熟

●　實(shí)現(xiàn)具有所需特性和形態(tài)的樹突細(xì)胞（DC）的高產(chǎn)率

●　維持樹突狀細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞刺激的效力

●　即用型，只需補(bǔ)充所需的細(xì)胞因子混合物

●　設(shè)計(jì)和生產(chǎn)有助于從研究轉(zhuǎn)移到臨床

◆高產(chǎn)活細(xì)胞且具有所需特性

圖1. 在化學(xué)成分明確的培養(yǎng)條件下獲得活細(xì)胞高產(chǎn)量

在存在GM-CSF和IL-4的條件下，來自5個(gè)不同供體的富集CD14+ 單核細(xì)胞在PRIME-XV DENDRITIC CELL MATURATION CDM、其他市售培養(yǎng)基 或RMPI+10%FBS中培養(yǎng)6天，以誘導(dǎo)分化，然后在TNF-α、IL-1β、IL-6和 PGE2中再培養(yǎng)2天，以誘導(dǎo)成熟，在各相應(yīng)培養(yǎng)基中聯(lián)合培養(yǎng)持續(xù)8天。通過流式細(xì)胞術(shù)分析所得細(xì)胞，以測定活細(xì)胞密度。產(chǎn)量表示為總活細(xì)胞占第0天鋪板的初始CD14⁺單核細(xì)胞的百分比。

圖2. 在PRIME-XV DENDRITIC CELL MATURATION CDM中成熟的樹突狀細(xì)胞表現(xiàn)出所需的表型和形態(tài)

在存在GM-CSF和IL-4的條件下，陰性富集的CD14⁺ 單核細(xì)胞在PRIME-XV DENDRITIC CELL MATURATION CDM中培養(yǎng)6天，以誘導(dǎo)分化，隨后在 TNF-α、IL-1β、IL-6和PGE₂ 中再培養(yǎng)2天，誘導(dǎo)成熟，聯(lián)合培養(yǎng)持續(xù)8天。用小鼠抗人CD80、HLA-DR和Hoechst 33342標(biāo)記細(xì)胞。在30x放大倍數(shù)下拍攝免疫熒光圖像。

◆在整個(gè)成熟過程中維持適當(dāng)?shù)臉?biāo)記物表達(dá)

圖3. 通過表面標(biāo)記表達(dá)譜證明其功能性

陰性選擇的CD14⁺ 單核細(xì)胞在PRIME-XVDENDRITIC CELL MATURATION CDM中培養(yǎng)6天，加入GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)分化，隨后在Jonuleit混合物（TNF-α、IL-1 β、IL-6和PGE2）或Kalinsky混合物（TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IFN-α和Poly（I:C））中再培養(yǎng)2天，以誘導(dǎo)成熟，聯(lián)合培養(yǎng)持續(xù)8天。收獲細(xì)胞，并用流式細(xì)胞儀分析表 面標(biāo)記物表達(dá)。在第0天（單核細(xì)胞）、第6天（未成熟DC）和第8天（成熟DC）分析用Jonuleit混合物培養(yǎng)的細(xì)胞，顯示了整個(gè)DC成熟過程中的典型表面標(biāo)志物表達(dá)譜。

◆保持對(duì)T細(xì)胞刺激的效力

圖4. PRIME-XV DENDRITIC CELL MATURATION CDM產(chǎn)生能夠誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖的DC

第8天收獲在PRIME-XV DENDRITIC CELL MATURATION CDM中培養(yǎng)的Mo-DC，與 同種異體CD4+ T細(xì)胞以1:20（DC與T）的比例在添加IL-2的T細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基中共培 養(yǎng)6天。通過CFSE缺失證實(shí)T細(xì)胞刺激能力（n=3）。CD4⁺ T細(xì)胞在無Mo-DC培養(yǎng)的單 獨(dú)IL-2中或添加抗CD3/抗CD28的IL-2中培養(yǎng)，分別作為陰性和陽性對(duì)照。

注：本頁面所刊載的內(nèi)容和數(shù)據(jù)均來自富士膠片歐文科技

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